检测专题
黄曲霉毒素(aflatoxin，简称为AF)是到目前为止所发现的毒性最大的真菌毒素。它可通过多种途径污染食品和饲料，直接或间接进入人类食物链，威胁人类健康和生命安全，对人体及动物内脏器官尤其是肝脏损害严重，该毒素是黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株的代谢产物，普遍存在于霉变的粮食及粮食制品中。黄曲霉毒素十分耐热，加热至230℃才能被完全破坏，因此一般烹饪加工也不易消除。
黄曲霉毒素广泛存在于粮油食品中,其中以花生和玉米污染最为严重,一般以热带和亚热带地区的饲料污染较重。由于它的剧毒性、强致癌性及存在的广泛性, 因此建立方便、 快速、 稳定的检测方法显得尤为重要。
目前黄曲霉毒素检测的国标方法有薄层色谱法、酶联免疫法、免疫亲和柱净化高效液相色谱法。薄层色谱法操作繁琐、污染大、定量差、耗时长；而酶联免疫法虽操作简单、灵敏度高, 但特异性差；免疫亲和柱高效液相色谱法是柱后衍生法, 它对于高黄曲霉毒素含量的样品偏差较大,且柱后衍生不普及,给使用带来不便。
杭州尔首科仪应用检测部采用自制净化柱净化，柱前衍生方法对黄曲霉毒素衍生化处理，利用全新高性能的LC-10B高效液相色谱仪和Waters 2475 多通道荧光检测器经实践检测可提供饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1的同时测定的HPLC检测方案，得出的结果准确可靠，检出限好，是一种很好的检测黄曲霉毒素的方法，仅供广大用户参考。
检测饲料中黄曲霉毒素的方法具体步骤如下：
1、高效液相色谱仪检测饲料中黄曲霉毒素仪器与试剂：
1.1 仪器
LC-10B高效液相色谱仪 杭州
Vertex 色谱柱 150mm×4.6mm×5μm
Waters 2475 多通道荧光检测器自制净化柱
1.2 试剂
甲醇，色谱纯。 乙腈，色谱纯。 三氟乙酸。 正己烷。 硅胶。 中性氧化铝。 聚酰胺粉。 黄曲霉毒素标准样品：纯度≥99%。
2、检测饲料中黄曲霉毒素试样溶液的制备：
2.1 试样的提取和净化使用粉碎机将饲料样品研细, 称取研细样品置于烧瓶或搅拌瓶中, 加入体积分数为84%的乙腈溶液, 在旋转震荡器上震荡。用漏斗、定性滤纸将其过滤到样品瓶中, 将过滤液通过自制净化柱净化, 弃去前面的, 然后将净化液转移至洁净的棕色瓶中, 在水浴60℃条件下用氮气吹干。
2.2 柱前衍生条件向氮气吹干的剩余物中加入正己烷、三氟乙酸,立即旋紧盖子。涡旋, 在40℃烘箱中衍生，室温下氮气吹干混合物, 用体积分数为15%的乙腈溶液溶解残余物并涡旋,以3000 r/ min的速度离心,把已经制备净化好的样品液进样到液相色谱分析。
3、检测饲料中黄曲霉毒素色谱条件：
色谱柱：Vertex 色谱柱 150mm×4.6mm×5μm；
流动相：乙腈溶液；
检测器：荧光检测器，波长：λEx= 360 nm , λEm = 440 nm； 流速：1.0mL/min; 温度：25℃； 进样量：20μL。
4、检测饲料中黄曲霉毒素液相色谱图：
利用上述液相色谱条件，5种黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1在10 min内即可获得很好的分离效果。
在含有黄曲霉毒素B1的饲料样品中添加5种黄曲霉毒素,利用自制净化柱净化, 然后进样分析。
国标里需要检测的黄曲霉毒素如下：
现行有效国家标准：
GB 5413.37-2010 食品安全国家标准 乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定
GB 5009.24-2010 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定
GB/T 18979-2003 食品中黄曲霉毒素的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法
GB/T 23212-2008 牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定 液相色谱-荧光检测法
GB/T 5009.22-2003 食品中黄曲霉毒素B1的测定
GB/T 5009.23-2006 食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定
GB/T 8381-2008 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 半定量薄层色谱法
GB/T 17480-2008 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 酶联免疫吸附法
现行有效的农业行业标准：
NY/T 1664-2008 牛乳中黄曲霉毒素M1的快速检测 双流向酶联免疫法
NY/T 1286-2007 花生黄曲霉毒素B1的测定 高效液相色谱法www.uhplc.cn
现行有效的出入境检验检疫行业标准：
SN 0339-1995 出口茶叶中黄曲霉毒素B1检验方法（中英文版）
SN 0637-1997 出口油籽,坚果及坚果制品中黄曲霉毒素的检验方法 液相色谱法
SN/T 1736-2006 进出口蜂蜜中黄曲霉毒素的检验方法 高效液相色谱法
SN/T 1664-2005 牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1、B1、B2、G1、G2含量的测定
SN/T 1101-2002 进出口油籽及粮谷中黄曲霉毒素的检验方法
关键词:黄曲霉毒素检测，测定饲料中黄曲霉毒素
