检测专题
升麻为常用中药，中国药典(2010年版)收载升麻为毛茛科升麻属植物升麻(Cimicifug a foetida L.)、兴安升麻(C.dahurica Maxim.)、大三叶升麻(C.heracleifolia Kom.)3种，以根茎入药，具有发表透疹、清热解毒、升举阳气的功能。升麻主要含有机酸 类、呋喃色原酮类和三萜类等成分。文献［1］及作者自己进行的药理实验均证明阿魏酸、 异阿魏酸是升麻的主要活性成分。有关升麻中阿魏酸和异阿魏酸的含量测定有分光光度法、 薄层扫描法，未见用高效液相色谱法测定。本文对药典收载升麻3种植物14 不同产地的样品，进行了中药升麻中阿魏酸和异阿魏酸的含量测定。
1检测中药升麻的仪器与试药
LC-10B高效液相色谱仪，包括高压恒流输液泵，紫外检测器,VI2010色谱工作站。HQQ005型超声波仪(无锡超声电子设备厂)。
阿魏酸由中国药品生物制品检定所提供，高效液相色谱法测定纯度为99%。异阿魏酸由本所 化学室提取分离，高效液相色谱法测定纯度为98.5%。
升麻样品分别从四川、陕西、云南、北京、河北、吉林、山西采集或购得，经作者鉴定学名 。
甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为重蒸水。
2色谱条件
流动相：甲醇-水-磷酸(50∶150∶0.1)；紫外检测波长：320 nm；灵敏度：1.0 AUFS；柱 温：24 ℃；流速：1 mL.min-1；色谱柱：Vertex C18分析柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)。
3 实验条件考察
3.1提取方法的选择 选择四川灌县产升麻粉碎后，分别用甲醇超声波 提取1次、提取2次和甲醇加热回流提取1次3种方法进行样品溶液制备。结果表明，超声波提 取 1次和提取2次阿魏酸和异阿魏酸的含量没有明显差异，而加热回流提取较超声波提取有明显 的差异，见表1。故本文选择甲醇加热回流提取的方法。
表1 不同提取方法的比较
不同提取方法 提取时间
/min 阿魏酸
含量/% 异阿魏酸
含量/%
超声波提取1次 40 0.0176 0.0805
超声波提取2次 40+30 0.0181 0.0812
加热回流提取1次 60 0.0415 0.1005
3.2稳定性试验
3.2.1 对照品溶液稳定性 取阿魏酸和异阿魏酸混合对照品溶液，在0， 1，2，3，4，5，6，7，10 h进样测定，结果在0～6 h内，阿魏酸和异阿魏酸峰面积基 本稳定，其RSD分别为1.5%和1.8%，n=7,6 h后，阿魏酸和异阿魏酸逐渐开始分解 ，在色谱图上出现2个吸收峰。
3.2.2 样品溶液稳定性 取样品溶液在0，1，2，3，4，5，6，7，1 0 h分别进样，结果与对照品相似，在0～6 h内，阿魏酸和异阿魏酸峰面积基本不变，其RSD 分别为1.3%和1.6%，n=7。
3.3重复性试验 取同一样品5份，接样品测定方法提取并测定。阿 魏酸和异阿魏酸含量的RSD分别为0.23%和0.41%。
3.4线性关系考察 精密称取干燥的对照品阿魏酸2.10 mg、异阿 魏酸2.14 mg，用甲醇配制成1 mL溶液，即分别为2.10 mg.mL-1及2.14 mg.mL -1溶 液，再分别取两液2，5，10，20，30，40，50，80，100 μL混合，用甲醇稀释成1 mL溶液 。按上述分析条件，进样10 μL，以对照品量(μg)对峰面积作图，阿魏酸在0.042～2.10 μg，异阿魏酸在0.043～2.14 μg范围内，其回归方程分别为：
Y=5.64×106X-2.33×105 r=0.999 3
Y=5.17×106X+2.12×105 r=0.999 4
3.5回收率试验 精密称取已知含量的生药样品0.5 g共5份，分 别加 入2.10 mg.mL-1阿魏酸和2.14 mg.mL-1异阿魏酸对照品溶液各100 μL， 待溶剂挥干后，按样品测定方法提取并测定。取5次测定的平均值计算回收率(n=5)，结 果 阿魏酸和异阿魏酸回收率分别为98.76%(RSD为1.6%)和异阿魏酸98.32%(RSD为1 .8%)。
4样品测定
4.1样品溶液的制备 将样品粉碎，过40目筛，精密称取0.5 g，加入甲 醇30 mL，加热回流提取1 h，过滤，残留物再分别用甲醇10 mL洗涤2次，合并提取液，蒸干 ，用甲醇定容于10 mL容量瓶，对于个别含量不在线性范围的样品，可进行适当的浓缩或稀 释。
4.2测定结果 用上述分析条件测定，分别精密量取样品溶液和5.3 μg .mL-1、阿魏酸5.1 μg.mL-1异阿魏酸的对照品混合溶液各10 μL进样测定 ，色谱图见图1，各样品测定结果见表2。
图1 阿魏酸和异阿魏酸对照品与升麻样品色谱图
A.对照品 B.样品(四川灌县)
1.阿魏酸(24.8 min) 2.异阿魏酸(32.7 min)
5讨论
5.1 对阿魏酸和异阿魏酸对照品溶液在190～400 nm波长范围内 进行紫外光谱扫描，阿魏酸和异阿魏酸最大吸收波长分别为313和320 nm，因320 nm处 灵敏 度较高，故选择320 nm作为检测波长。
5.2由于阿魏酸和异阿魏酸为同分异构体，色谱行为很相似，我们比较了 甲醇-水-冰乙酸(20∶80∶1，30∶70∶1，35∶65∶1)，甲醇-水-磷酸(50∶ 50∶0.1，40∶60 ∶0.1，30∶70∶0.1，50∶150∶0.1)及乙腈-水-冰乙酸(25∶75∶1)等，结果发现以 甲醇-水-磷酸(50∶150∶0.1)被测物分离最好。故选择其为流动相。
表2 升麻药材中阿魏酸和异阿魏酸的含量(%，n=3)
样品 来源 产地 阿魏酸 异阿魏酸
升麻(Cimicifuga 商品 四川灌县 0.042 0.0 99
foetida L.) 商品 四川阿坝 0.063 0.022
采集 陕西华龙山 0.003 0.009
商品 陕西宁强 0.010 0.003
商品 陕西平利 0.007 0.003
商品 四川成都 0.003 0.027
商品 陕西安康 0.005 0.003
商品 云南昆明 0.006 0.054
商品 北京市 0.022 0.026
商品 吉林靖宇 0.014 0.086
兴安升麻(C.dahurica 商品 山西阳高 0.010[ 〗0.183
(Turcz.)Maxim.) 商品 河北承德 0.011 0.089
商品 吉林皎河 0.008 0.072
大三叶升麻(C.heracleifolia
Kom.) 采集 辽宁沈阳 0.004 0.073
5.3对于样品溶液的制作，我们比较了2种方法， 种是样品用甲醇加 热回流提取后，过滤，直接定容；另一种是样品用甲醇加热回流提取后，过滤，浓缩至干， 残渣用1%碳酸氢钠溶液溶解，离心，取上清液后，残渣再加碳酸氢钠溶液重复提取1次，合 并上清液，用5%盐酸酸化pH 3～4后，氯仿萃取3次，合并氯仿液，浓缩至干，甲醇定容 结 果表明样品经酸碱处理后，样品干净，分离度好，但由于处理步骤较多，被测组分损失较大。故本文选择甲醇提取后直接定容制作样品溶液的方法。
5.4对照品阿魏酸和异阿魏酸及样品配成溶液后，不稳定，容易分解，应 放棕色瓶避光保存，而且须当天配制。
5.5阿魏酸在植物界分布较广，而异阿魏酸分布较少，阿魏酸和异阿魏酸 同时存在的植物更少。从表2分析结果可以看出升麻、兴安升麻、大三叶升麻3种植物均含阿 魏酸和异阿魏酸，所以用本方法所得的高效液相色谱图阿魏酸和异阿魏酸的有无，可以作 升麻的定性鉴别依据之一。
5.6阿魏酸和异阿魏酸是升麻主要活性成分之一，其含量高低对于评价升 麻的质量具有重要的意义。
关键词:中药升麻中阿魏酸的测定，检测中药升麻的方法
